什么是細(xì)胞自噬?
簡單的說就是“吃掉自己”。是真核生物中進(jìn)化保守的對細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行周轉(zhuǎn)的重要過程。
該過程中一些損壞的蛋白或細(xì)胞器被雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小泡包裹后,送入溶酶體(動物)或液泡(酵母和植物)中進(jìn)行降解并得以循環(huán)利用。自噬包括生理?xiàng)l件下的基礎(chǔ)型自噬和應(yīng)激條件下的誘導(dǎo)型自噬。研究表明,自噬能在細(xì)胞穩(wěn)態(tài)、衰老、免疫、腫瘤發(fā)生及神經(jīng)退行性疾病等多種生理病理過程中發(fā)揮重要作用。
(自噬原理圖)
LC3(自噬標(biāo)志物)是微管相關(guān)蛋白輕鏈3(MAP1LC3)的簡稱,它貫穿整個(gè)自噬過程,哺乳動物的LC3可分為三種:LC3A、LC3B和LC3C。
自噬發(fā)生時(shí),LC3 蛋白合成后立即在其羧基端被 Atg4 所剪切,產(chǎn)生細(xì)胞漿定位的 LC3-I。在自噬過程中,LC3-I 會被包括 Atg7 和 Atg3 在內(nèi)的泛素樣體系所修飾和加工,產(chǎn)生分子量為 14kD 的 LC3-II,并定位到自噬小體中。
LC3-II 的含量和發(fā)生自噬的程度成正比,LC3-II/I比值的大小可估計(jì)自噬水平的高低。
得益于熒光蛋白技術(shù)的發(fā)展,我們可以通過熒光蛋白標(biāo)記的方式,直觀的看到自噬現(xiàn)象和過程。
自噬病毒工具,便于直接感染目的細(xì)胞后直觀地觀察細(xì)胞自噬的整體水平。
自噬單熒光標(biāo)記慢病毒
吉滿自主研發(fā)出單熒光(綠光或紅光)標(biāo)記的自噬指示產(chǎn)品,當(dāng)細(xì)胞內(nèi)沒有自噬發(fā)生時(shí),熒光-LC3融合蛋白會均勻地分散在細(xì)胞質(zhì)中,一旦細(xì)胞發(fā)生自噬活動,熒光-LC3融合蛋白就會聚集并轉(zhuǎn)位到自噬體膜,此時(shí)在熒光顯微鏡下可清晰地觀察到明亮的熒光斑點(diǎn),斑點(diǎn)數(shù)量的多少就代表了自噬活動的強(qiáng)弱。
自噬雙熒光標(biāo)記慢病毒
吉滿自主研發(fā)的雙熒光自噬慢病毒,可用于標(biāo)記及追蹤LC3以及自噬流的變化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白,而mRFP是穩(wěn)定的熒光表達(dá)基團(tuán),不受外界影響。由于自噬小體進(jìn)入第二階段后,與溶酶體進(jìn)行融合,形成自噬溶酶體。由于自噬溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境,導(dǎo)致PH下降,GFP淬滅,因此,GFP的減弱表明溶酶體與自噬小體融合形成了自噬溶酶體。而mRFP是一直穩(wěn)定表達(dá)的,因而可以通過GFP與mRFP的亮點(diǎn)比例來評價(jià)自噬流進(jìn)程。點(diǎn)擊了解產(chǎn)品
產(chǎn)品清單