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甄選服務(wù)② | 吉滿腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus)包裝
吉滿生物
2024-10-08

背景介紹


腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus,AAV),是目前發(fā)現(xiàn)的一類結(jié)構(gòu)最簡單的單鏈DNA缺陷型病毒,通常需要腺病毒或皰疹病毒幫助其在體內(nèi)復(fù)制擴(kuò)增。


重組腺相關(guān)病毒(recombinant AAV,rAAV),是利用AAV2型基因組與不同血清型的醫(yī)殼蛋白基因組結(jié)合產(chǎn)生的混合病毒載體。通常我們所說的AAV其實就是rAAV。


吉滿生物利用AAV Helper-Free System,由包裝質(zhì)粒(編碼目的基因以及兩個ITR序列組成)、輔助質(zhì)粒(Cap和Rep基因)以及腺病毒Helper質(zhì)粒三種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293細(xì)胞所獲得的重組腺相關(guān)病毒可以滿足客戶的不同實驗需求。


腺相關(guān)病毒基因遞送和表達(dá)特點


1、特異性好


AAV血清型種類繁多,不同血清型在感染時具有不同的組織器官偏好性,實現(xiàn)感染特異性,是動物實驗首選


2、擴(kuò)散性強(qiáng)


AAV體積小、滴度高,因此具有遠(yuǎn)高于腺病毒和慢病毒的擴(kuò)散性,能夠大面積感染組織


3、安全性高


目前已經(jīng)有多項基于AAV載體的治療藥物被應(yīng)用于臨床,表現(xiàn)出很高的安全性


4、免疫原性低


重組AAV不帶有病毒功能及結(jié)構(gòu)蛋白,用于基因治療基本不引起免疫反應(yīng)


AAV-血清型


AAV血清型,即抗血清類型,不同的AAV血清型具有不同的衣殼蛋白空間結(jié)構(gòu)。不同衣殼蛋白空間結(jié)構(gòu)識別與結(jié)合的細(xì)胞表面受體不同,這也導(dǎo)致不同血清型AAV感染效率、組織親嗜性、表達(dá)時間不同


根據(jù)衣殼蛋白的蛋白結(jié)構(gòu)和所結(jié)合的細(xì)胞外受體分子不同,可以分為數(shù)十種血清型。不同血清型的AAV組織感染嗜親性各不相同,表現(xiàn)出一定的器官靶向特異性,如下:


表1  不同AAV血清型介紹


AAV-啟動子


啟動子決定了下游基因的表達(dá)強(qiáng)度和模式,是位于結(jié)構(gòu)基因5’端上游的DNA序列,負(fù)責(zé)RNA聚合酶識別、結(jié)合、轉(zhuǎn)錄的DNA序列,常見的有CMV,EF1α,CAG,U6,Ubi 等。


啟動子根據(jù)其作用方式和功能分類如圖所示,這種分類大體上反映了它們各自的特點,但不是絕對的。在某些情況下,一種類型的啟動子往往兼有其它類型啟動子的特性。


組織特異性啟動子


又稱為器官特異性啟動子。在這類啟動子的作用下,基因的表達(dá)往往只限于某些特定的組織或器官,同時表現(xiàn)出發(fā)育調(diào)節(jié)等特性。從而克服了組成型啟動子啟動的外源基因在受體植物中非特異、持續(xù)、高效表達(dá)所造成的浪費(fèi),增加轉(zhuǎn)基因的效果,因此人們對特異性啟動子的研究和應(yīng)用越來越重視。


特異性啟動子來源,大部分的組織特異性啟動子是從特定細(xì)胞專一表達(dá)的基因啟動子鑒定得來的。但不是所有的細(xì)胞特異性表達(dá)的基因的啟動子都可以作為AAV載體的細(xì)胞特異性啟動子。


表2  現(xiàn)有組織特異啟動子


吉滿案例展示

案例一


使用吉滿生物提供的腺相關(guān)病毒(AAV-shIRF4,Genomeditech)抑制IRF4的表達(dá)后,緩解了狼瘡小鼠的疾病進(jìn)程

(Signal Transduct Target Ther(IF:13.493;Q1).2023 May 22;8(1):188.)


案例二


使用腺相關(guān)病毒AAV介導(dǎo)的小鼠PKCε的肝臟過表達(dá)

(Cell Metab (IF:21.567;Q1).2023 Jan 3;35(1):101-117.e11.)


案例三


通過尾靜脈注射Tie-Nrf2 shRNA,Tie-PGC-1α shRNA(AAV9,5x1011 viral particles, Genomeditech)和對照腺相關(guān)病毒,與糖尿病ApoE?/?小鼠相比,Rb1處理后的小鼠主動脈動脈粥樣硬化病變大受抑制,Nrf2或PGC-1α缺失后,Rb1并不能減弱動脈粥樣硬化斑塊的形成

(Cell Death Dis (IF:6.304;Q1). 2022 Sep 26;13(9):824.)


案例四


使用吉滿生物提供AAV9病毒經(jīng)尾靜脈注射2周后觀察心臟熒光圖;

(Mol Ther Nucleic Acids. 2020 Aug 29;22:251-262.)


吉滿生物可為客戶提供定制過表達(dá)AAV、shRNA AAV、Cas9-sgRNA AAV,此外更有大量現(xiàn)貨AAV產(chǎn)品可供選擇,涵蓋光遺傳、化學(xué)遺傳、鈣指示劑、神經(jīng)遞質(zhì)探針等工具。點擊了解產(chǎn)品

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甄選服務(wù)② | 吉滿腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus)包裝
吉滿生物
2024-10-08

背景介紹


腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus,AAV),是目前發(fā)現(xiàn)的一類結(jié)構(gòu)最簡單的單鏈DNA缺陷型病毒,通常需要腺病毒或皰疹病毒幫助其在體內(nèi)復(fù)制擴(kuò)增。


重組腺相關(guān)病毒(recombinant AAV,rAAV),是利用AAV2型基因組與不同血清型的醫(yī)殼蛋白基因組結(jié)合產(chǎn)生的混合病毒載體。通常我們所說的AAV其實就是rAAV。


吉滿生物利用AAV Helper-Free System,由包裝質(zhì)粒(編碼目的基因以及兩個ITR序列組成)、輔助質(zhì)粒(Cap和Rep基因)以及腺病毒Helper質(zhì)粒三種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293細(xì)胞所獲得的重組腺相關(guān)病毒可以滿足客戶的不同實驗需求。


腺相關(guān)病毒基因遞送和表達(dá)特點


1、特異性好


AAV血清型種類繁多,不同血清型在感染時具有不同的組織器官偏好性,實現(xiàn)感染特異性,是動物實驗首選


2、擴(kuò)散性強(qiáng)


AAV體積小、滴度高,因此具有遠(yuǎn)高于腺病毒和慢病毒的擴(kuò)散性,能夠大面積感染組織


3、安全性高


目前已經(jīng)有多項基于AAV載體的治療藥物被應(yīng)用于臨床,表現(xiàn)出很高的安全性


4、免疫原性低


重組AAV不帶有病毒功能及結(jié)構(gòu)蛋白,用于基因治療基本不引起免疫反應(yīng)


AAV-血清型


AAV血清型,即抗血清類型,不同的AAV血清型具有不同的衣殼蛋白空間結(jié)構(gòu)。不同衣殼蛋白空間結(jié)構(gòu)識別與結(jié)合的細(xì)胞表面受體不同,這也導(dǎo)致不同血清型AAV感染效率、組織親嗜性、表達(dá)時間不同。


根據(jù)衣殼蛋白的蛋白結(jié)構(gòu)和所結(jié)合的細(xì)胞外受體分子不同,可以分為數(shù)十種血清型。不同血清型的AAV組織感染嗜親性各不相同,表現(xiàn)出一定的器官靶向特異性,如下:


表1  不同AAV血清型介紹


AAV-啟動子


啟動子決定了下游基因的表達(dá)強(qiáng)度和模式,是位于結(jié)構(gòu)基因5’端上游的DNA序列,負(fù)責(zé)RNA聚合酶識別、結(jié)合、轉(zhuǎn)錄的DNA序列,常見的有CMV,EF1α,CAG,U6,Ubi 等。


啟動子根據(jù)其作用方式和功能分類如圖所示,這種分類大體上反映了它們各自的特點,但不是絕對的。在某些情況下,一種類型的啟動子往往兼有其它類型啟動子的特性。


組織特異性啟動子


又稱為器官特異性啟動子。在這類啟動子的作用下,基因的表達(dá)往往只限于某些特定的組織或器官,同時表現(xiàn)出發(fā)育調(diào)節(jié)等特性。從而克服了組成型啟動子啟動的外源基因在受體植物中非特異、持續(xù)、高效表達(dá)所造成的浪費(fèi),增加轉(zhuǎn)基因的效果,因此人們對特異性啟動子的研究和應(yīng)用越來越重視。


特異性啟動子來源,大部分的組織特異性啟動子是從特定細(xì)胞專一表達(dá)的基因啟動子鑒定得來的。但不是所有的細(xì)胞特異性表達(dá)的基因的啟動子都可以作為AAV載體的細(xì)胞特異性啟動子。


表2  現(xiàn)有組織特異啟動子


吉滿案例展示

案例一


使用吉滿生物提供的腺相關(guān)病毒(AAV-shIRF4,Genomeditech)抑制IRF4的表達(dá)后,緩解了狼瘡小鼠的疾病進(jìn)程

(Signal Transduct Target Ther(IF:13.493;Q1).2023 May 22;8(1):188.)


案例二


使用腺相關(guān)病毒AAV介導(dǎo)的小鼠PKCε的肝臟過表達(dá)

(Cell Metab (IF:21.567;Q1).2023 Jan 3;35(1):101-117.e11.)


案例三


通過尾靜脈注射Tie-Nrf2 shRNA,Tie-PGC-1α shRNA(AAV9,5x1011 viral particles, Genomeditech)和對照腺相關(guān)病毒,與糖尿病ApoE?/?小鼠相比,Rb1處理后的小鼠主動脈動脈粥樣硬化病變大受抑制,Nrf2或PGC-1α缺失后,Rb1并不能減弱動脈粥樣硬化斑塊的形成

(Cell Death Dis (IF:6.304;Q1). 2022 Sep 26;13(9):824.)


案例四


使用吉滿生物提供AAV9病毒經(jīng)尾靜脈注射2周后觀察心臟熒光圖;

(Mol Ther Nucleic Acids. 2020 Aug 29;22:251-262.)


吉滿生物可為客戶提供定制過表達(dá)AAV、shRNA AAV、Cas9-sgRNA AAV,此外更有大量現(xiàn)貨AAV產(chǎn)品可供選擇,涵蓋光遺傳、化學(xué)遺傳、鈣指示劑、神經(jīng)遞質(zhì)探針等工具。點擊了解產(chǎn)品

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