背景介紹
基因過表達(gene overexpression)是將目的基因編碼區(qū)序列(CDS)克隆到相應的質(zhì)粒或病毒載體上，利用載體骨架上構(gòu)建的調(diào)控元件，使基因可以在人為的控制條件下實現(xiàn)大量轉(zhuǎn)錄和翻譯，從而實現(xiàn)目的基因的過表達。此外，還可以選擇報告基因進行示蹤或抗性基因進行篩選。
基因過表達研究應用
常用的基因表達載體有質(zhì)粒載體和病毒載體，病毒載體又包括：腺相關(guān)病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體和逆轉(zhuǎn)錄病毒載體等，廣泛應用于體外和體內(nèi)基因功能研究。
有哪些常見類型的過表達
一、常規(guī)蛋白表達
常規(guī)蛋白表達的同時可以為蛋白表達添加融合或非融合的熒光標簽，親和標簽，亞細胞定位系列等不同類型的修飾。
二、非編碼RNA表達
與常規(guī)蛋白表達不同的是，由于非編碼RNA(鏈接非編碼RNA介紹)僅僅轉(zhuǎn)錄但不翻譯，無蛋白產(chǎn)生，因此此類表達載體(尤其是lncRNA)最好獨立表達熒光蛋白，且常規(guī)蛋白表達的修飾基本不能使用。目前常見的非編碼RNA主要為microRNA、lncRNA、circRNA三大類，表達載體與之對應。
【吉滿生物】基因過表達工具介紹（上）
一、質(zhì)粒載體 點擊了解產(chǎn)品
在生物醫(yī)學領(lǐng)域，利用常規(guī)轉(zhuǎn)染將質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)到動物細胞中仍然被大多數(shù)實驗室使用。主要因為常規(guī)質(zhì)粒基因表達載體在技術(shù)上的簡便性以及在各類細胞中的高效轉(zhuǎn)染率。
載體特點
①過程較簡單：相比病毒載體要進行病毒包裝，常規(guī)質(zhì)粒載體通過常規(guī)轉(zhuǎn)染即可把質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細胞；
②載體容量大：有足夠大的容量可以放置用戶所感興趣的序列；
③表達水平高：可以產(chǎn)生非常高的拷貝數(shù)，使外源基因能高水平的表達，但不同細胞類型拷貝數(shù)也有差異；
④表達時間短：瞬時轉(zhuǎn)染，在細胞里以游離DNA的狀態(tài)存在，表達時間持續(xù)3-7天；
⑤轉(zhuǎn)染差異大：不同類型的細胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率差異較大，非分裂細胞比分裂細胞難轉(zhuǎn)染，原代細胞比永生化細胞難轉(zhuǎn)染。
吉滿服務
吉滿生物擁有豐富的質(zhì)粒構(gòu)建經(jīng)驗，能為客戶提供高拷貝復制能力且對細胞具有高效轉(zhuǎn)染率的質(zhì)粒載體，同時可根據(jù)客戶需求對轉(zhuǎn)染了該載體的細胞進行篩選和可視化追蹤。點擊了解產(chǎn)品
二、慢病毒載體 點擊了解產(chǎn)品
慢病毒載體來源于人類免疫缺陷病毒HIV，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族。由于具有目的基因和啟動子選擇的靈活性以及轉(zhuǎn)染細胞類型的廣泛性，使得慢病毒載體系統(tǒng)成為倍受歡迎的外源基因表達系統(tǒng)。
慢病毒重組載體構(gòu)建完成后需要輔助質(zhì)粒的參與才能包裝形成病毒顆粒。通過對上清液中活體病毒的直接收集或進一步濃縮病毒后可用于轉(zhuǎn)染靶細胞，釋放到宿主細胞中的病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄成雙鏈DNA，進一步整合到宿主細胞的基因組中。
載體特點
①感染譜廣：可有效感染腫瘤細胞、神經(jīng)元、心肌細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型細胞；
②穩(wěn)定表達：通過將外源基因整合到宿主細胞基因組上，可實現(xiàn)目的基因長期穩(wěn)定表達，不隨細胞分裂傳代而丟失；
③安全性高：未發(fā)現(xiàn)致病性，已被用于CAR-T治療作用于人體；
④免疫原性低：體內(nèi)注射不會引起明顯的免疫反應，適用于動物實驗；
⑤包裝容量有限：插入的外源基因需在4kb以下；
⑥包裝滴度較低：相比腺病毒與腺相關(guān)病毒，慢病毒包裝滴度稍低。
吉滿服務流程
吉滿生物專注病毒包裝，擁有非常豐富的慢病毒包裝經(jīng)驗，能對大多數(shù)宿主細胞具有高效的轉(zhuǎn)導能力，能有效的把載體整合到靶細胞基因組，并實現(xiàn)外源基因的高水平表達。
三、腺相關(guān)病毒載體 點擊了解產(chǎn)品
腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus, AAV)是一類無法自主復制的二十面體微小病毒。通常情況下，只有在輔助病毒的參與下，才能進行復制。
腺相關(guān)病毒(AAV)載體系統(tǒng)是對腺相關(guān)病毒進行優(yōu)化的一種基因傳遞系統(tǒng)。AAV重組載體構(gòu)建完成后與輔助質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染進入包裝細胞，包裝成病毒顆粒。純化后，轉(zhuǎn)導進入宿主細胞，線性雙鏈DNA基因組以游離DNA的形式存在于細胞核中。輔助質(zhì)粒能夠代替輔助病毒，幫助AAV實現(xiàn)自我復制，從而提高載體系統(tǒng)的生物安全性。
載體特點
①特異性好：AAV血清型種類繁多，不同血清型在感染時具有不同的組織器官偏好性，實現(xiàn)感染特異性；
②擴散性強：AAV體積小、滴度高，因此具有遠高于腺病毒和慢病毒的擴散性，能夠大面積感染組織；
③安全性高：目前已經(jīng)有多項基于AAV載體的治療藥物被應用于臨床，表現(xiàn)出很高的安全性；
④免疫原性低：重組AAV不帶有病毒功能及結(jié)構(gòu)蛋白，用于基因治療基本不引起免疫反應；
⑤局限性：適合在體實驗，體外實驗轉(zhuǎn)染效率較低；外源基因需較長時間開始表達；載體容量小，目前最多容納5kb外源DNA。
吉滿服務流程
吉滿生物的AAV載體經(jīng)過優(yōu)化后，是一個包裝病毒滴度高，細胞轉(zhuǎn)導效率高，轉(zhuǎn)基因水平表達高的載體系統(tǒng)，具有極高的生物安全性，同時可以根據(jù)客戶需求使用不同的衣殼蛋白包裝病毒，賦予病毒不同的血清型。
