細(xì)胞自噬(autophagy)是真核生物中進(jìn)化保守的對細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行周轉(zhuǎn)的重要過程。該過程中一些損壞的蛋白或細(xì)胞器被雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小泡包裹后,送入溶酶體(動(dòng)物)或液泡(酵母和植物)中進(jìn)行降解并得以循環(huán)利用。
檢測自噬形成時(shí),使用電鏡耗時(shí)長,不利于監(jiān)測(Monitoring)自噬形成,而hLC3在自噬形成過程中會發(fā)生聚集的現(xiàn)象,因此吉滿生物利用hLC3這種現(xiàn)象,構(gòu)建了帶GFP標(biāo)記的用于細(xì)胞自噬檢測的質(zhì)粒和病毒產(chǎn)品。無自噬時(shí),GFP-hLC3融合蛋白彌散在胞漿中;自噬形成時(shí),GFP-hLC3融合蛋白轉(zhuǎn)位至自噬體膜,在熒光顯微鏡下形成多個(gè)明亮的綠色熒光斑點(diǎn),一個(gè)斑點(diǎn)相當(dāng)于一個(gè)自噬體,可以通過計(jì)數(shù)來評價(jià)自噬活性的高低