報(bào)告基因檢測(cè)是現(xiàn)代分子生物學(xué)研究領(lǐng)域中分析結(jié)構(gòu)基因旁側(cè)區(qū)域潛在的順式元件(如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和沉默子等)和反式作用因子相互作用關(guān)系的一種重要工具。吉滿(mǎn)生物生產(chǎn)的雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(Dual Luciferase Reporter Gene Aassy Kit),是一種結(jié)合螢火蟲(chóng)和海腎熒光素酶檢測(cè)的先進(jìn)輔助報(bào)告基因技術(shù)。
雖然螢火蟲(chóng)和海腎熒光素酶都具有生物發(fā)光報(bào)告基因的檢測(cè)特點(diǎn),但它們卻具有完全不同的進(jìn)化起源,因而它們的酶結(jié)構(gòu)和底物要求完全不同。我們利用這一特點(diǎn),將它們配合起來(lái)使用,即可形成十分有效的雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng),其中Renilla Luciferase通常作為內(nèi)對(duì)照。
它的實(shí)驗(yàn)原理是先以螢火蟲(chóng)熒光素(firefly luciferin,以下簡(jiǎn)稱(chēng)熒光素)為底物來(lái)檢測(cè)細(xì)胞中的螢火蟲(chóng)熒光素酶(firefly luciferase,以下簡(jiǎn)稱(chēng)熒光素酶)。熒光素酶在ATP,Mg2+和O2參與下催化熒光素,生成氧化熒光素(oxyluciferin),熒光素在被氧化過(guò)程中,產(chǎn)生生物發(fā)光(Bioluminescence)。然后在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中抑制該反應(yīng),來(lái)終止螢火蟲(chóng)熒光素的生物發(fā)光,同時(shí)加入海腎熒光素酶(Renilla Luciferase)的底物腔腸素(coelenterazine)。在O2參與下,腔腸素被海腎熒光素酶催化氧化成氧化熒光素(coelenteramide)產(chǎn)生生物發(fā)光。然后通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀或液閃測(cè)定儀測(cè)定生物發(fā)光。
雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)在單熒光素酶報(bào)告基因的基礎(chǔ)上引入了“內(nèi)參對(duì)照”報(bào)告基因,這樣可以在最大程度上減小細(xì)胞數(shù)目、細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和轉(zhuǎn)染效率等外在因素對(duì)于實(shí)驗(yàn)的影響,使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為可信。